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兩種儀器pk—高效液相色譜儀與高效毛細管電泳儀
高效毛細管電泳儀(HPCE)是以毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進行分離,是分析科學(xué)繼高效液相色譜儀之后的又一重大進展,使分析科學(xué)從微升級進入到了納升級水平,不僅使單細胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機。HPCE與高效液相色譜儀比較如下:
一、相同點:
1、檢測器:
HPCE和高效液相色譜儀均可采用紫外檢測器、熒光檢測器和電化學(xué)檢測器等。但由于HPCE采用在柱檢測,光路短,靈敏度和線性范圍都不如高效液相色譜儀。
2、定性和定量方法:
HPCE的定性和定量方法與高效液相色譜儀相同,采用出峰時間定性,峰面積或峰高定量。
3、柱效和分辨率:
HPCE的柱效和分辨率計算方法與高效液相色譜儀相同。
二、不同點:
1、分離原理:
(1)HPCE:基于組分在載體電解質(zhì)中遷移速度的不同。
(2)高效液相色譜儀:基于組分在固定相和流動相之間分配系數(shù)的不同。
2、分離模式:
(1)HPCE:毛細管區(qū)帶電泳、毛細管膠束電動色譜、毛細管凝膠電泳、毛細管等電聚焦電泳和毛細管等速電泳等。
(2)高效液相色譜儀:正相色譜、反相色譜、離子交換色譜和凝膠色譜等。
3、分離柱:
(1)HPCE:小內(nèi)徑毛細管柱內(nèi)裝不同載體電解質(zhì)。
(2)高效液相色譜儀:小內(nèi)徑毛細管柱內(nèi)裝不同固定相。
4、進樣方式:
(1)HPCE:電動進樣、壓力進樣和擴散進樣。
(2)高效液相色譜儀:微量注射器進樣、六通閥進樣和自動進樣器進樣。
5、進樣體積:
(1)HPCE:納升級。
(2)高效液相色譜儀:微升級。
6、溶質(zhì)驅(qū)動方式:
(1)HPCE:以高壓直流電場為驅(qū)動力。
(2)高效液相色譜儀:以高壓輸液泵驅(qū)動流動相。
7、采用毛細管的目的:
(1)HPCE:有效散熱,使徑向溫度梯度更小。
(2)高效液相色譜儀:消除渦流擴散,縮短組分在流動相中的傳質(zhì)過程。
8、柱效:
(1)HPCE:72萬TP/m,大分子更大,尤其生物大分子可達3000萬TP/m,能檢測到單細胞和單分子水平。
(2)高效液相色譜儀:一般為25TP/m,大分子更小。
9、柱價:
(1)HPCE:柱價低,
(2)高效液相色譜儀:柱價高,且易沾污,易失效。
10、分離液:
(1)HPCE:在水溶液介質(zhì)中進行,不污染環(huán)境。
(2)高效液相色譜儀:常在含有機溶劑(如甲醇等)介質(zhì)中進行,易造成環(huán)境污染。
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