煙酸（尼克酸或維生素PP）是參與體內(nèi)酶系統(tǒng)的一種維生素，對機體的碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)代謝起主要作用，當肌體缺乏煙酸時則可引起新陳代謝的障礙；葉酸是一種廣泛存在于綠色蔬菜中的B族維生素，缺乏葉酸會使得雛雞生長不良，羽毛不正常，貧血和骨短粗癥，母雞所產(chǎn)的蛋在孵化時，胚胎死亡率高等。

賽智科技參考國標（GB/T 17813-1999），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色譜儀，經(jīng)實踐檢測可提供復合預混料中煙酸和葉酸的HPLC檢測方案，得出的結(jié)果準確可靠，檢出限好，適用于復合預混合飼料和維生素預混合飼料中煙酸和葉酸的測定，僅供廣大用戶參考。

以下是復合預混料中煙酸和葉酸的測定的詳細檢測方法。

1　 儀器與試劑

1.1 儀器
　　LC-10Tvp高效液相色譜儀
　　Vertex 色譜柱　250mm×4.6mm×5μm
　　實驗室常用儀器設備
　　超聲波水浴
　　超純水裝置
　　離心機（3000r/min）

1.2 試劑
　　己烷磺酸鈉。
　　磷酸氫二鉀。
　　磷酸二氫鉀。
　　冰乙酸，優(yōu)級純。
　　三乙胺，色譜純。
　　甲醇，色譜純。
　　乙腈，色譜純。
　　碳酸鈉。
　　煙酸標準品：含量≥99%。
　　葉酸標準品：含量≥99%。

2 　測定原理
　　試樣中的煙酸、 葉酸用水-甲醇-乙酸混合溶液提取，將濾液注入高效液相色譜反相柱上進行分離，用紫外檢測器在280nm波長處定量測定。

3 　試樣溶液的制備
　　稱取維生素預混料或者復合預混料適量，于100ml棕色容量瓶中，加入碳酸鈉溶液，浸濕試樣加適量提取液混勻，于超聲波水浴上振蕩提取，用提取液定容至刻度，混合均勻，過濾或離心，再經(jīng)0.45μm過濾膜過濾至帶蓋小瓶中，調(diào)整試驗溶液的濃度，待機測定。

4 　色譜條件
　　色譜柱：Vertex 色譜柱　250mm×4.6mm×5μm；
　　流動相：2%乙腈磷酸緩沖液；
　　流速：1.4mL/min；
　　溫度：室溫；
　　進樣量：20μL；
　　檢測波長：280nm。